D-荧光素钾盐
D-荧光素钾盐(D-Luciferin Potassium Salt, CAS: 115144-35-9)是萤火虫荧光素酶最常用的底物。在ATP、镁离子和氧气存在条件下,被荧光素酶氧化脱羧发出波长约560nm的蓝绿色生物光。
主要应用:
- 活体生物发光成像(BLI):肿瘤示踪、干细胞示踪、感染模型、药物体内药效评估
- 体外荧光素酶报告基因检测:启动子活性、信号通路、药物筛选
- ATP检测:细胞代谢、微生物污染检测
- 高通量测序和各种报告基因系统
三种形式的核心活性成分都是D-荧光素,主要区别在于溶解性:
- D-荧光素(游离酸):水溶性差,需溶于弱碱(NaOH/KOH)或DMSO/甲醇,适合体外实验
- D-荧光素钠盐:水溶性好,可直接水溶,适合体外和体内实验
- D-荧光素钾盐:水溶性最好(>30mg/mL),使用方便,溶剂无毒性,特别适合活体动物实验
根据文献和使用习惯,钾盐形式最为常用。Purescix首发为钾盐形式,满足绝大多数实验需求。
【储存液配制】
- 用无菌PBS或生理盐水配制成15mg/mL储存液(小鼠常用浓度)
- 充分溶解后,0.22μm滤膜过滤除菌
- 分装成单次用量,-20℃避光保存,避免反复冻融
【活体成像使用】
- 小鼠:按150mg/kg体重腹腔注射(如20g小鼠注射200μL 15mg/mL溶液)
- 注射后10-15分钟达到发光峰值,可进行成像
- 成像前需麻醉小鼠
【体外实验使用】
- 工作浓度一般为0.1-1mM,根据实验体系优化
注意:操作时尽量避光,现配现用效果最佳。
- 储存条件:-20℃,避光、密封、干燥保存
- 运输条件:湿冰运输(加冰袋保温)
- 保质期:固体粉末在正确储存条件下可稳定2年以上
- 配成溶液后:-20℃分装保存建议3个月内使用完毕
荧光素钾盐对光和空气敏感,反复冻融会加速降解,建议收到后尽快分装。