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荧光探针标准溶解与储存液配制操作指南

一、溶解前准备工作

1.1 操作环境：活细胞/动物体内实验建议在超净台内配制，保证无菌；纯体外生化检测、无细胞体系可在普通避光操作台进行

1.2 样品预处理：将探针粉末从-20℃取出，置于室温平衡2-3分钟再开盖，避免水汽凝结导致样品吸潮降解。

1.3 器材准备：棕色避光离心管（无棕色管时透明离心管需用铝箔包裹避光）

1.4 溶剂准备：提前确认产品说明书推荐的溶解溶剂，最常用为DMSO（二甲基亚砜），部分水溶性探针可用PBS或超纯水溶解。

二、标准溶解详细步骤

2.1 回温平衡：冻存的探针粉末取出后，室温密封回温2-3分钟，确保管内无冷凝水。

2.2 浓度计算：建议配制的储存液浓度为工作浓度的1000倍（常规推荐5–10 mM，优先按产品说明书指定浓度配制），方便后续稀释使用

2.3 加液溶解：按计算体积加入对应溶剂，盖紧管盖，轻柔涡旋振荡30-60秒或用枪头吹打混匀，确保粉末完全溶解。

2.4 超声助溶（可选）：注意全程避光、控制超声温度（冰浴或间歇超声），避免探针过热和光照降解

2.5 溶液观察：正常溶解后应为澄清、透明、无沉淀、无絮状物的均匀液体；若出现不溶物，可尝试延长超声时间或调整溶剂。

三、溶解溶剂选择标准（关键参数）

3.1 溶解性好，纯DMSO冰点约18.5℃，-20℃冻存时为固态（若-20℃不结冰说明DMSO已吸水，含水会加速探针降解，需更换无水DMSO）

3.2 可使用PBS（pH7.2-7.4，离子型探针对pH敏感，过酸过碱可能导致猝灭或沉淀）或无菌超纯水溶解；水溶液稳定性普遍较差，不建议长期冻存，尽量现配现用

3.3 部分探针可能推荐使用DMF、甲醇、乙醇等溶剂，具体以产品说明书为准；甲醇/乙醇挥发性强，配制后需严格密封，避免溶剂挥发导致浓度升高、探针析出

3.4 禁止操作：不可随意用培养基直接溶解探针，易导致溶解不均和探针聚集；不可用含血清的缓冲液配制储存液。

四、储存液分装与保存细则

4.0 干粉原始保存：-20℃密封、干燥、避光储存，防止吸潮降解；称量前室温回温，避免开盖时冷凝水进入。

4.1 立即分装：溶解完成后立即按照单次实验用量分装至棕色避光管中，避免原液反复冻融。

4.1a 无菌处理：活细胞/体内实验用储存液需经0.22 μm滤膜过滤除菌；纯体外生化检测无需过滤。

4.2 保存温度：DMSO配制的储存液一般-20℃避光冻存，部分探针需-80℃保存，具体以说明书为准。

水溶液配制的储存液：一般4℃避光短期保存（数天至数周），不建议-20℃冻存，冻融循环会加速降解。

4.3 保存时效：荧光探针储存液稳定性差异较大，从数天到数月不等，建议参考产品说明书的有效期，尽量现配现用。

4.4 禁止操作：储存液禁止反复冻融、禁止常温放置、禁止长时间暴露于光照下。

4.5 冻融操作规范：储存液从-20℃取出后，室温避光自然溶解，禁止水浴加热融化。

五、溶解常见问题与即时处理

5.3 荧光信号弱、淬灭快：可能是探针已降解或操作中光照过度，建议新配储存液并全程严格避光。